1.工具:刀片、镊子。
2.设备:立体显微镜、恒温箱
3.药剂:
缓冲液:(1) 9.0708g 的KH2PO4 溶于1000ml水中;(2) 11.876g的 Na2HPO4·2H2O 溶于1000ml水中。两份(1)加上三份 (2)即可,调整为pH7。
TEZ溶液:2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride(氯化三苯基四唑),以缓冲液配置0.5% 的TEZ溶液,装于褐色瓶中备用。
4.本法分三步骤:
(1)种子吸湿及前处理,使药剂容易渗入细胞,
(2)染色,
(3)直接或露胚来判断染色结果。
5.种子吸水:
有些可以浸水,有些则需慢慢吸水,如大豆、高粱;
加速种子吸收TEZ的方法如割切 、去壳、真空处理等。
6.种子切割后至染色研判前,种子不得干燥失水,特别在显微镜下观查时。
7.研判:
(1)注意重要部位的染色结果,
(2)注意染色色泽,异常色泽如半透明状为死组织;染色深暗可能的原因,是细胞受伤或染色过度应区分,
(3)无染色原因,可能是细胞已死或是因药剂尚未渗透到该处,应区分。
8.下列种子不适于使用本法:
(1)因遗传的关系种子本身衰弱,则虽是活种子但可能染色不佳。
(2)种子内部感染微生物。
(3)胚部本身颜色深,则虽是死种子但也可能被误为活种子。
9.研判标准的建立:
首先确立TEZ的染色最适方法与程序,再将单粒染色结果归成若干(如10至20)类型,然后取无休眠种子样品多批(15批以上),每批进行800粒种子的标准发芽率试验及400粒种子的TEZ测定,将TEZ测定结果按前述订出的类别归类。全部样品作完后进行统计分析(例如root mean square法),将所有类型分成活的及死的两项